Для чего используют анализ ПЦР?

07.06.2017

ВАЖНО! Сергей Бубновский: Эффективное средство от венерических заболеваний существует... Читайте далее >>

Многие современные клиники используют ПЦР-диагностику инфекций. ПЦР - полимеразная цепная реакция. Это один из лучших методов для установления точного диагноза. Расшифровка анализа позволяет определить возбудителя инфекции.

Для чего нужна ПЦР-диагностика?

Метод является экспериментальным исследованием в молекулярной биологии. Благодаря ПЦР стало возможным многократно увеличить незначительные концентрации отдельных фрагментов ДНК, полученные в процессе забора биологического материала.

При помощи ферментов тот или иной участок нуклеиновой кислоты можно удвоить. Весь процесс происходит в искусственных условиях. То есть, метод позволяет создать "клоны" определенного участка кислоты.

Помимо этого, используя ПЦР, можно производить мутации генетического материала, сращивать несколько фрагментов ДНК вместе. При помощи этого метода можно установить факт отцовства (именно этот метод используется при проведении генетической экспертизы). Также метод позволяет клонировать уже имеющиеся гены и выделять новые.

Принцип действия и ход реакции

В основе метода ПЦР лежит принцип образования комплементарных комплексов, возникающих между матрицей и праймером. Комплексы представляют собой короткие синтетические нуклеотиды. Длина каждого составляет около 20-130 букв.

Для проведения одной реакции требуется необходимый участок ДНК, раствор, обеспечивающий условия реакции, праймер, ДНК-полимераза, устойчивая к воздействию температур и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты.

Изображение 2 В ходе реакции происходит около пятидесяти циклов. Каждый цикл состоит из трех стадий:

  1. Денатурация. Двухцепочечная ДНК-матрица нагревается до 96 градусов в течение двух минут. В результате нагревания цепи молекулы должны разъединиться. Иногда перед этапом денатурации проводится реакция "горячего старта", при которой вся смесь предварительно нагревается в течение пяти минут, что позволяет снизить количество неспецифичных продуктов в ходе реакции.
  2. В процессе следующего этапа – отжига - температура реакции понижается так, чтобы она была чуть ниже температуры плавления цепочек ДНК. Этап отжига длится около двух минут. За это время праймеры должны плотно связаться с матрицей в определенном месте. Неправильный выбор температурного режима может привести к нарушению данного этапа реакции.
  3. На этапе элонгации ДНК реплицирует матричную цепочку, используя праймер. Состав полимеразы определяет температуру элонгации. Так, наиболее часто элонгируемые полимеразы Taq и Pfu достигают максимальной активности при температуре около 72 градусов. Весь процесс длится около 15-ти минут.

Когда используют и в чем преимущества

Даже если в пробе биоматериала присутствует всего лишь несколько молекул ДНК, метод позволяет точно определить возбудителя заболевания. ПЦР-анализ может быть проведен в следующих случаях:

  • При выявлении долгорастущих возбудителей в процессе диагностики заболеваний, передающихся половым путем.
  • В диагностике ВИЧ, СПИД, гепатита и других вирусных инфекций. Данная реакция является более чувствительной по сравнению с другими методами микробиологического и иммунохимического исследования.
  • В диагностике бактериальных инфекций, а также хламидий, уреплазмы, микоплазмы и прочих.
  • В диагностике скрытых и некультивируемых форм микроорганизмов.Такие микроорганизмы обнаруживаются у пациентов с латентными или хроническими инфекциями.

Изображение 3 Преимущества метода:

  • ПЦР-диагностика высокоэффективна в отношении внутриклеточных паразитов, обладающих высокой антигенной изменчивостью.
  • Метод способен выявить возбудителей не только в биологическом материале пациента, но и в материале биологической среды (почва, вода и т.д.)
  • Метод обладает высокой чувствительностью к гонорее, герпесу и вирусу папилломы человека.
  • В пульмонологии ПЦР применяется в рамках дифференциальной диагностики вирусной и бактериальной пневмонии и туберкулёза.
  • Гастроэнтерологические исследования также включают ПЦР при диагностике хеликобактериоза.
  • ПЦР является экспресс-методом диагностики таких заболеваний, как: вирусные гепатиты В, С и G, дифтерия и сальмонеллёз.
  • Гематология использует метод ПЦР при выявлении онковирусов.

ВАЖНО!

Как спасти себя и забыть о венерологических болезнях рассказывает доктор медицинских наук, профессор Бубновский Сергей Михайлович. Читать интервью >>

Проведение анализа

Забор биологического материала может быть произведен с различных участков тела:

  • При выявлении инфекций мочеполовой системы берется мазок из урогенитального тракта, шейки матки или производится забор мочи.
  • Биологическим материалом при диагностике ВИЧ инфекций и гепатитов служит кровь.
  • Инфекционный мононуклеоз может быть выявлен при исследовании содержимого мазка из зева.
  • В некоторых случаях может быть произведен соскоб материала с необходимого участка тела или слизистой.

Картинка 4 Если пациенту предстоит сдать мазок, и мужчинам, и женщинам необходимо провести специальную подготовку к анализу:

  • Три часа до сдачи анализа пациенту нельзя мочиться.
  • Исследование нельзя проводить в период приема антибиотиков.
  • Девушкам мазок рекомендуется сдавать в середине цикла.
  • Половой контакт желательно исключить за сутки до сдачи биоматериала.
  • Несколько часов до сдачи мазка запрещено подмываться.

Остальные типы исследований специальной подготовки не требуют.

Расшифровка

Обычно расшифровка анализа ПЦР проводится непосредственно врачом, хотя сейчас многие клиники предоставляют подробное описание проведенного анализа и самостоятельно расшифровывают результат.

Иллюстрация 5 В случае если результат анализа отрицательный, это означает, что исследуемый биологический материал не содержит никаких следов инфекций или скрытых возбудителей и пациенту не о чем волноваться.

Если же анализ ПЦР показал положительный результат, а пациент при этом не чувствует недомоганий, это означает, что инфекция находится в скрытой форме и заболевание только начинает развиваться.

Точность диагностики составляет практически сто процентов, что позволяет выявить инфекцию на самой ранней стадии и при правильно начатом лечении предотвратить ее дальнейшее развитие.

Цена

Стоимость анализа варьируется в зависимости от типа выявляемого возбудителя и может меняться в зависимости от регионов. При расчете стоимости анализа следует учитывать и то, сколько возбудителей необходимо выявить. Если за одно посещение вам необходимо сдать анализ на вирус папилломы человека и на уреплазму, врач возьмет два разных мазка, следовательно, заплатить придется за два отдельных анализа.

Иллюстрация 6

Точность

Пациенты часто сталкиваются с ложноположительным или ложноотрицательным результатом анализа. В первом случае тест показывает наличие вредоносного гена или болезнетворной бактерии, в то время как на самом деле он не присутствует в организме.

Согласно статистике, анализ способен точно определить тип возбудителя и определить инфекцию даже при малом содержании ее ДНК в биоматериале.

Погрешность метода полимеразной цепной реакции по сравнению с другими иммунологическими методами исследований минимальна. Анализ ПЦР никогда не дает ложноположительных результатов и в редких случаях может дать ложноотрицательный результат.

Кто сказал, что вылечить венерические заболевания тяжело?

  • Невероятно… Можно вылечить сифилис, гонорею, микоплазмоз, трихомониаз и другие венерические заболевания навсегда!
  • Это раз.
  • Без приема антибиотиков!
  • Это два.
  • За неделю!
  • Это три.

Эффективное средство существует. Перейдите по ссылке и узнайте что рекомендует венеролог Сергей Бубновский!

Список используемой литературы
1. Русский медицинский журнал - http://www.rmj.ru/;
2. Журнал «Консилиум Медикум» - http://con-med.ru/;
3. Журнал «Лечащий врач» - http://www.lvrach.ru/;
4. Справочник лекарственных препаратов Видаль - http://www.vidal.ru/;
5. Журнал «Вестник дерматологии и венерологии» - http://www.vestnikdv.ru/;
6. Научно-практический журнал «Урология» - http://www.urologyjournal.ru/ru/;
7. Журнал «Европейская урология» - http://uroweb.ru/european-urology;
8. Научно-практический журнал «Клиническая нефрология» - http://www.nephrologyjournal.ru/ru/;
9. Научно-практический журнал «Гинекология и акушерство» - http://www.aig-journal.ru/ru/.

Рейтинг
  1. 5
  2. 4
  3. 3
  4. 2
  5. 1